创新例内参
1、内参抗体和标签抗体有哪些
内参抗体(Internal Control Antibody)是对内参蛋白进行检测,以校正蛋白定量过程中的实验误差以及验证转膜、显色等步骤是否正常!常用的内参包含 GAPDH、β-actin和 β-tubulin;及线粒体内参 COX IV和核内参 Histone H3和 PCNA等
内参抗体:
Beta-Actin mAb (1C7) 细胞总蛋白 42 kD Abbkine A01010 小鼠源单克隆
Beta-Actin mAb (1C7) , HRP 细胞总蛋白 42 kD Abbkine A01015 小鼠源单克隆,HRP偶联
GAPDH mAb (2B5) 细胞总蛋白 36 kD Abbkine A01020 小鼠源单克隆
GAPDH mAb (2B5) , HRP 细胞总蛋白 36 kD Abbkine A01025 小鼠源单克隆,HRP偶联
Beta-Tubuline mAb (3G6) 细胞总蛋白 55 kD Abbkine A01030 小鼠源单克隆
Plant Actin mAb (3T3) 植物细胞总蛋白 42 kD Abbkine A01050 小鼠源单克隆
PCNA mAb (1D7) 细胞核蛋白 28 kD Abbkine A01040 小鼠源单克隆
COX IV mAb (14Y2) 细胞线粒体总蛋白 16 kD Abbkine A01060 小鼠源单克隆
Histone H3 mAb (2D10) 细胞核蛋白 18 kD Abbkine A01070 小鼠源单克隆
标签抗体(Tag Antibody)可用于检测各种商品化表达载体上的标签序列(如: Myc、Flag、His、GST、HA等),籍以分析目的蛋白的表达含量及其功能;
标签抗体:
Anti-Biotin Antibodies
Anti-Dye Antibodies
Anti-FITC Antibodies
Anti-Fluorescent Protein Antibodies
Anti-HRP Antibodies
Beta Galatosidase Antibodies
FLAG Tag Antibodies
GST Tag Antibodies
HA Tag Antibodies
His Tag Antibodies
Myc Tag Antibodies
TAP Tag Antibodies
V5 Tag Antibodies
2、做RT-PCR内参的作用是什么?应该如何选择管家基因
你说的应该是real time PCR吧,注意RT其实是逆转录reverse transcription的缩写,和real time一定要分开来.
常说的qPCR,qRT-PCR,都是通过实时(real time)的方法,测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢,由于之前RNA提取、反转等步骤,各个步骤存在不同的效率,ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量,因此,需要一个内参来做为参考.
比方说,A基因的ct值,在a样品中是18,在b样品中是20,由于a b样品存在RNA质量等等一系列不同,你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍.
这时候,我们需要一个内参,假如内参ct值在a样品中是14,而在b样品中是15.由于内参的稳定性,在不同样品中被认为是表达量一致的,因此,A基因的在ab样品之间的-ΔΔct值是1,也就是表达量为2倍的关系.
这里,我们可以知道内参的作用,即通过测量内参,可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化.内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因,这就是为什么内参经常选择看家基因的原因.以小鼠为例,常用的内参有actin gapdh hprt等等.
3、RT-PCR是,内参是什么时候加入,作用是什么?谢谢
你说的应该是real
time
pcr吧,注意rt其实是逆转录reverse
transcription的缩写,和real
time一定要分开来。
常说的qpcr,qrt-pcr,都是通过实时(real
time)的方法,测定样品中某个模版的起始量ct值
但是呢,由于之前rna提取、反转等步骤,各个步骤存在不同的效率,ct值并无法真实反应样品中模版的绝对量,因此,需要一个内参来做为参考。
比方说,a基因的ct值,在a样品中是18,在b样品中是20,由于a
b样品存在rna质量等等一系列不同,你无法直接就判断这个基因在a样品中的表达量是b样品的4倍。
这时候,我们需要一个内参,假如内参ct值在a样品中是14,而在b样品中是15。由于内参的稳定性,在不同样品中被认为是表达量一致的,因此,a基因的在ab样品之间的-δδct值是1,也就是表达量为2倍的关系。
这里,我们可以知道内参的作用,即通过测量内参,可以在后面分析过程中将不同样品的起始量均一化。内参需要选择在不同样品中有稳定表达量的基因,这就是为什么内参经常选择看家基因的原因。以小鼠为例,常用的内参有actin
gapdh
hprt等等。
当然,现在的很多观点认为这些基因在不同组织中丰度也不同,例如gapdh,在线粒体含量高的组织中丰度高,很多人认为用基因组dna做内参会更加靠谱,当然这是后话了,选择gapdh无碍于现阶段的实验,如果觉得不靠谱,可以选择两个内参。
你所研究的物种,应该有人已经发表过相应的内参,直接上数据库搜就可以了。
原创内容,码字不易,万望采纳。
4、不了解内参酒,内参酒是什么酒?
首先内参酒的名字非常有说辞。酒鬼酒的产地是湖南的湘西地区,这里风景秀丽,民风淳朴,内参酒便是在画家黄永玉的画中诞生的。别具一格的酒鬼酒瓶,得到大家的高度赞许,取名“内参”,意为“少数人看的,数量有限”。
从此也奠定的内参酒的整体基调,有内涵,少宣传,定量生产,限量销售,高价值高价格。价格取决于价值,内参酒深厚的文化底蕴和自身完美的酒质,虽是单瓶千元以上的价格,但依然获得消费者的高度认可。也侧面体现了消费者对白酒的追求将走向更高端,多元化,文化属性成为白酒的核心价值。好酒应具备两个特征:品质及风味的特色,这是酒行业永远的话题,馥郁香型酒鬼内参酒具备这两个特征,在融合和创新方面走在了前列。
“一口三香”都做到不容易,要做到平衡、协调更难,酒鬼内参酒给消费者的感官体验非常好。在湘西地带,鬼就是一种神秘力量的代表,表示着一种人与山水对话、与自然融合的精神状态,与其说酒鬼酒是一种上好的饮品,还不如说酒鬼酒是一种艺术精品,它的酒瓶设计独特,粗麻布袋装着酒鬼酒,当然酒鬼酒内参酒也是一样,有着跟酒鬼酒一样的特质,口感上大致相同。
(推荐阅读;“葵花牌”茅台酒为什么收藏价值那么高)在湘西地带,鬼就是一种神秘力量的代表,表示着一种人与山水对话、与自然融合的精神状态,与其说酒鬼酒是一种上好的饮品,还不如说酒鬼酒是一种艺术精品,它的酒瓶设计独特,粗麻布袋装着酒鬼酒,当然酒鬼酒内参酒也是一样,有着跟酒鬼酒一样的特质,口感上大致相同。 (推荐阅读;“葵花牌”茅台酒为什么收藏价值那么高)。
5、什么是公司内参?怎么做内参?怎么编辑?
一般意义的公司内参仅仅是对某家公司的公开信息进行深度挖掘,找出人们忽视但重要的地方。这种资料分析与证券研究报告不同,没有调研,仅有公开信息的深度挖掘,尽量贴近市场热点。做好内参需要提前做好大量的准备工作,例如股票的分类,热点的预期、公司信息面的深度挖掘等等,只需要突出其中的、符合市场炒作需求的一点即可。
6、内参书写格式
格式 新华社你好然后 你就开始写吧 然后你再看看其他人咋说然后 再给我 翟
7、wb跑内参和目的蛋白区别
wb跑内参和目的蛋白区别:wb跑内参内参通常是在被检样本中高表达且表达水平相对稳定的蛋白。WB可以对目的蛋白进行半定量分析,判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少,就是取决于内参的标定。
WB又称为免疫印迹 (immune blot) ,是根据抗原抗体的特异性结合半定量的检测样品中的某种蛋白的方法。
蛋白质印迹 (Western Blot),作为检测蛋白表达及半定量的基础实验方法。
很多蛋白的表达是有组织特异性的,例如IL-10R,在视网膜,脾脏和肺腺癌组织中有高表达,其他组织表达含量较低;还有一些蛋白,则需要特定的刺激条件才会高表达,这种情况往往在磷酸化蛋白及炎症因子蛋白等中较为常见,如果未做特殊的处理,目的蛋白表达含量很低,无法被WB检测出。
内参是western blot法非常重要而必须的部分。它保证了目的蛋白表达量的相对多少。内参是指由细胞中管家基因编码的蛋白,其在各组织细胞中的表达相对稳定,因此在测定目的蛋白的相对水平时常用它做对照物。
内参抗体,是WB实验中的重要参考,WB可以对目的蛋白进行半定量分析,判断不同样品中目的蛋白表达含量的多少,就是取决于内参的标定。内参选择在WB实验中是很关键的因素,可不是GAPDH或者β-actin万用的哦。
内参如何选择,最重要的决定因素就是目的蛋白,尤其是目的蛋白的表达位置及预处理条件。
8、请问,GAPDH作为RT-PCR内参的原理是什么呀?我知道为什用它做内参了,就是不清楚怎么用它,谢谢啦!
因为GAPDH的基因表达量在是不同状态下是变化很小的,所以可以认为GAPDH表达是恒定的,所以可以选择它来做内参。
拓展资料:
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文缩写。GAPDH是糖酵解反应中的一个酶,广泛分布于各种组织中的细胞。
该酶是糖酵解反应中的一个酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa。该酶基因为管家(house keeping)基因,几乎在所有组织中都高水平表达,在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的,且不受含有的部分识别位点、佛波脂等的诱导物质的影响而保持恒定,故被广泛用作抽提total RNA,poly(A)+ RNA,Western blot等实验操作的标准化的内参。常用的内参有,ACTB(β-actin、β-肌动蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在于避免RNA定量误差、加样误差以及各PCR反应体系中扩增效率不均一、各孔间的温差等所造成的误差、这些都是管家基因,在各个组织中的表达量相对稳定,其中18S同整个基因谱有关(负责装配),它在总RNA中占的比例最高。
【GAPDH的作用】广泛用作Western blot蛋白质标准化的内参,即将每个样品测得的目的蛋白含量与本样品的GAPDH含量相除,得到每个样品目的蛋白的相对含量,然后才进行样品与样品之间的比较。
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脱氢酶( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文缩写。GAPDH是参与糖酵解的一种关键酶,由4个30-40kDa的亚基组成,分子量146kDa,检测条带大约在36kDa。GAPDH基因几乎在所有组织中都高水平表达,且GAPDH 作为管家基因在同种细胞或者组织中的蛋白质表达量一般是恒定的。
【Western Blot】蛋白质印迹法(免疫印迹试验)。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。