創新例內參
1、內參抗體和標簽抗體有哪些
內參抗體(Internal Control Antibody)是對內參蛋白進行檢測,以校正蛋白定量過程中的實驗誤差以及驗證轉膜、顯色等步驟是否正常!常用的內參包含 GAPDH、β-actin和 β-tubulin;及線粒體內參 COX IV和核內參 Histone H3和 PCNA等
內參抗體:
Beta-Actin mAb (1C7) 細胞總蛋白 42 kD Abbkine A01010 小鼠源單克隆
Beta-Actin mAb (1C7) , HRP 細胞總蛋白 42 kD Abbkine A01015 小鼠源單克隆,HRP偶聯
GAPDH mAb (2B5) 細胞總蛋白 36 kD Abbkine A01020 小鼠源單克隆
GAPDH mAb (2B5) , HRP 細胞總蛋白 36 kD Abbkine A01025 小鼠源單克隆,HRP偶聯
Beta-Tubuline mAb (3G6) 細胞總蛋白 55 kD Abbkine A01030 小鼠源單克隆
Plant Actin mAb (3T3) 植物細胞總蛋白 42 kD Abbkine A01050 小鼠源單克隆
PCNA mAb (1D7) 細胞核蛋白 28 kD Abbkine A01040 小鼠源單克隆
COX IV mAb (14Y2) 細胞線粒體總蛋白 16 kD Abbkine A01060 小鼠源單克隆
Histone H3 mAb (2D10) 細胞核蛋白 18 kD Abbkine A01070 小鼠源單克隆
標簽抗體(Tag Antibody)可用於檢測各種商品化表達載體上的標簽序列(如: Myc、Flag、His、GST、HA等),籍以分析目的蛋白的表達含量及其功能;
標簽抗體:
Anti-Biotin Antibodies
Anti-Dye Antibodies
Anti-FITC Antibodies
Anti-Fluorescent Protein Antibodies
Anti-HRP Antibodies
Beta Galatosidase Antibodies
FLAG Tag Antibodies
GST Tag Antibodies
HA Tag Antibodies
His Tag Antibodies
Myc Tag Antibodies
TAP Tag Antibodies
V5 Tag Antibodies
2、做RT-PCR內參的作用是什麼?應該如何選擇管家基因
你說的應該是real time PCR吧,注意RT其實是逆轉錄reverse transcription的縮寫,和real time一定要分開來.
常說的qPCR,qRT-PCR,都是通過實時(real time)的方法,測定樣品中某個模版的起始量ct值
但是呢,由於之前RNA提取、反轉等步驟,各個步驟存在不同的效率,ct值並無法真實反應樣品中模版的絕對量,因此,需要一個內參來做為參考.
比方說,A基因的ct值,在a樣品中是18,在b樣品中是20,由於a b樣品存在RNA質量等等一系列不同,你無法直接就判斷這個基因在a樣品中的表達量是b樣品的4倍.
這時候,我們需要一個內參,假如內參ct值在a樣品中是14,而在b樣品中是15.由於內參的穩定性,在不同樣品中被認為是表達量一致的,因此,A基因的在ab樣品之間的-ΔΔct值是1,也就是表達量為2倍的關系.
這里,我們可以知道內參的作用,即通過測量內參,可以在後面分析過程中將不同樣品的起始量均一化.內參需要選擇在不同樣品中有穩定表達量的基因,這就是為什麼內參經常選擇看家基因的原因.以小鼠為例,常用的內參有actin gapdh hprt等等.
3、RT-PCR是,內參是什麼時候加入,作用是什麼?謝謝
你說的應該是real
time
pcr吧,注意rt其實是逆轉錄reverse
transcription的縮寫,和real
time一定要分開來。
常說的qpcr,qrt-pcr,都是通過實時(real
time)的方法,測定樣品中某個模版的起始量ct值
但是呢,由於之前rna提取、反轉等步驟,各個步驟存在不同的效率,ct值並無法真實反應樣品中模版的絕對量,因此,需要一個內參來做為參考。
比方說,a基因的ct值,在a樣品中是18,在b樣品中是20,由於a
b樣品存在rna質量等等一系列不同,你無法直接就判斷這個基因在a樣品中的表達量是b樣品的4倍。
這時候,我們需要一個內參,假如內參ct值在a樣品中是14,而在b樣品中是15。由於內參的穩定性,在不同樣品中被認為是表達量一致的,因此,a基因的在ab樣品之間的-δδct值是1,也就是表達量為2倍的關系。
這里,我們可以知道內參的作用,即通過測量內參,可以在後面分析過程中將不同樣品的起始量均一化。內參需要選擇在不同樣品中有穩定表達量的基因,這就是為什麼內參經常選擇看家基因的原因。以小鼠為例,常用的內參有actin
gapdh
hprt等等。
當然,現在的很多觀點認為這些基因在不同組織中豐度也不同,例如gapdh,在線粒體含量高的組織中豐度高,很多人認為用基因組dna做內參會更加靠譜,當然這是後話了,選擇gapdh無礙於現階段的實驗,如果覺得不靠譜,可以選擇兩個內參。
你所研究的物種,應該有人已經發表過相應的內參,直接上資料庫搜就可以了。
原創內容,碼字不易,萬望採納。
4、不了解內參酒,內參酒是什麼酒?
首先內參酒的名字非常有說辭。酒鬼酒的產地是湖南的湘西地區,這里風景秀麗,民風淳樸,內參酒便是在畫家黃永玉的畫中誕生的。別具一格的酒鬼酒瓶,得到大家的高度贊許,取名「內參」,意為「少數人看的,數量有限」。
從此也奠定的內參酒的整體基調,有內涵,少宣傳,定量生產,限量銷售,高價值高價格。價格取決於價值,內參酒深厚的文化底蘊和自身完美的酒質,雖是單瓶千元以上的價格,但依然獲得消費者的高度認可。也側面體現了消費者對白酒的追求將走向更高端,多元化,文化屬性成為白酒的核心價值。好酒應具備兩個特徵:品質及風味的特色,這是酒行業永遠的話題,馥郁香型酒鬼內參酒具備這兩個特徵,在融合和創新方面走在了前列。
「一口三香」都做到不容易,要做到平衡、協調更難,酒鬼內參酒給消費者的感官體驗非常好。在湘西地帶,鬼就是一種神秘力量的代表,表示著一種人與山水對話、與自然融合的精神狀態,與其說酒鬼酒是一種上好的飲品,還不如說酒鬼酒是一種藝術精品,它的酒瓶設計獨特,粗麻布袋裝著酒鬼酒,當然酒鬼酒內參酒也是一樣,有著跟酒鬼酒一樣的特質,口感上大致相同。
(推薦閱讀;「葵花牌」茅台酒為什麼收藏價值那麼高)在湘西地帶,鬼就是一種神秘力量的代表,表示著一種人與山水對話、與自然融合的精神狀態,與其說酒鬼酒是一種上好的飲品,還不如說酒鬼酒是一種藝術精品,它的酒瓶設計獨特,粗麻布袋裝著酒鬼酒,當然酒鬼酒內參酒也是一樣,有著跟酒鬼酒一樣的特質,口感上大致相同。 (推薦閱讀;「葵花牌」茅台酒為什麼收藏價值那麼高)。
5、什麼是公司內參?怎麼做內參?怎麼編輯?
一般意義的公司內參僅僅是對某家公司的公開信息進行深度挖掘,找出人們忽視但重要的地方。這種資料分析與證券研究報告不同,沒有調研,僅有公開信息的深度挖掘,盡量貼近市場熱點。做好內參需要提前做好大量的准備工作,例如股票的分類,熱點的預期、公司信息面的深度挖掘等等,只需要突出其中的、符合市場炒作需求的一點即可。
6、內參書寫格式
格式 新華社你好然後 你就開始寫吧 然後你再看看其他人咋說然後 再給我 翟
7、wb跑內參和目的蛋白區別
wb跑內參和目的蛋白區別:wb跑內參內參通常是在被檢樣本中高表達且表達水平相對穩定的蛋白。WB可以對目的蛋白進行半定量分析,判斷不同樣品中目的蛋白表達含量的多少,就是取決於內參的標定。
WB又稱為免疫印跡 (immune blot) ,是根據抗原抗體的特異性結合半定量的檢測樣品中的某種蛋白的方法。
蛋白質印跡 (Western Blot),作為檢測蛋白表達及半定量的基礎實驗方法。
很多蛋白的表達是有組織特異性的,例如IL-10R,在視網膜,脾臟和肺腺癌組織中有高表達,其他組織表達含量較低;還有一些蛋白,則需要特定的刺激條件才會高表達,這種情況往往在磷酸化蛋白及炎症因子蛋白等中較為常見,如果未做特殊的處理,目的蛋白表達含量很低,無法被WB檢測出。
內參是western blot法非常重要而必須的部分。它保證了目的蛋白表達量的相對多少。內參是指由細胞中管家基因編碼的蛋白,其在各組織細胞中的表達相對穩定,因此在測定目的蛋白的相對水平時常用它做對照物。
內參抗體,是WB實驗中的重要參考,WB可以對目的蛋白進行半定量分析,判斷不同樣品中目的蛋白表達含量的多少,就是取決於內參的標定。內參選擇在WB實驗中是很關鍵的因素,可不是GAPDH或者β-actin萬用的哦。
內參如何選擇,最重要的決定因素就是目的蛋白,尤其是目的蛋白的表達位置及預處理條件。
8、請問,GAPDH作為RT-PCR內參的原理是什麼呀?我知道為什用它做內參了,就是不清楚怎麼用它,謝謝啦!
因為GAPDH的基因表達量在是不同狀態下是變化很小的,所以可以認為GAPDH表達是恆定的,所以可以選擇它來做內參。
拓展資料:
GAPDH或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脫氫酶( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文縮寫。GAPDH是糖酵解反應中的一個酶,廣泛分布於各種組織中的細胞。
該酶是糖酵解反應中的一個酶,由4個30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa。該酶基因為管家(house keeping)基因,幾乎在所有組織中都高水平表達,在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恆定的,且不受含有的部分識別位點、佛波脂等的誘導物質的影響而保持恆定,故被廣泛用作抽提total RNA,poly(A)+ RNA,Western blot等實驗操作的標准化的內參。常用的內參有,ACTB(β-actin、β-肌動蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在於避免RNA定量誤差、加樣誤差以及各PCR反應體系中擴增效率不均一、各孔間的溫差等所造成的誤差、這些都是管家基因,在各個組織中的表達量相對穩定,其中18S同整個基因譜有關(負責裝配),它在總RNA中占的比例最高。
【GAPDH的作用】廣泛用作Western blot蛋白質標准化的內參,即將每個樣品測得的目的蛋白含量與本樣品的GAPDH含量相除,得到每個樣品目的蛋白的相對含量,然後才進行樣品與樣品之間的比較。
【GAPDH】或G3PDH是甘油醛-3-磷酸脫氫酶( glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase )的英文縮寫。GAPDH是參與糖酵解的一種關鍵酶,由4個30-40kDa的亞基組成,分子量146kDa,檢測條帶大約在36kDa。GAPDH基因幾乎在所有組織中都高水平表達,且GAPDH 作為管家基因在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恆定的。
【Western Blot】蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。